医学微生物学格兰染色实验报告怎么写
革兰染色法
【步骤】:制片、染色、镜检
1、制片
涂片 :取洁净载玻片一张,用接种环取生理盐水2环,置于玻片上,接种环灭菌后,取细菌培养物少许与盐水混匀,并涂成均匀薄膜涂片。如用液体材料,如痰、尿液、脓汁等可直接涂片,不必加生理盐水。
干燥 :涂片最好在室温下自然干燥,必要时可将标本面向上,小心间断地在弱火高处烘干,但切勿紧靠火焰将涂膜烤枯。
固定:涂片干燥后,将标本片在酒精灯上快速的来回通过三次,共约2s~3s,注意温度不可太高,以涂片涂膜的反面触及皮肤觉轻微烫觉即可。
固定目的:①杀死细菌;②使菌体与玻片粘附较牢,在染色时不致被染液和水冲掉;③菌体蛋白变性易着色。
2、染色
结晶紫初染 1 min → 卢戈氏碘液媒染 1 min → 95%酒精脱色 30sec~1 min → 稀释石炭酸复红复染 1 min,油镜观察
【原理】:
①革兰阳性细菌细胞壁结构较致密,肽聚糖层厚,脂质含量少,乙醇不易渗入;革兰阴性菌细胞壁结构较疏松,肽聚糖层少,脂质含量多,乙醇易渗入。
②革兰阳性菌的等电点低,革兰阴性菌的等电点较高,在相同pH条件下,革兰阳性菌所带负电荷比革兰阴性菌多,与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固不易脱色。
③革兰阳性菌细胞内含有大量核糖核酸镁盐,可与结晶紫和碘牢固的结合成大分子复合物,不易被乙醇脱色;而革兰阴性菌细胞内含极少量的核糖核酸镁盐,吸附染料量少,形成的复合物分子也较小,故易被乙醇脱色。
【结果观察】:紫色为阳性,红色为阴性
【影响因素】
①操作因素:涂片太薄或太厚,固定时菌体过分受热,以及脱色时间长短,都会影响染色结果
②染液因素:所有染液应防止染液蒸发而改变浓度,特别是卢戈碘液久存或受光作用后易失去媒染作用;涂片积水过多会改变染液浓度,影响染色效果
【意义】:
①鉴定细菌:可将细菌分为革兰阳性菌(紫色)和革兰阴性菌(红色),
②观察致病性:大多数G+菌以外毒素为主要致病物质,而G- 菌以内毒素为主要致病物质。两者的致病机制和临床表现各不相同,
③参考选择抗菌药物:大多数G+菌对青霉素、头孢菌素等敏感;大多数G- 菌对氨基苷类抗生素如链霉素、庆大霉素等敏感。
【用途】:一般细菌学检查或鉴定
我这个比较简单概括,你最好详细化,比如染色步骤
冰冻病理切片怎么运输和保存
病理切片是组织或者细胞经过特殊处理以后,放在玻璃切片上,滴上中性树脂,然后用薄的盖玻片盖着制成的玻璃切片。
它的本质是玻璃,没有特殊的保存条件,不受湿度和温度的影响。在病理科,病理切片是保存在专用的切片柜内,室温保存即可。病理切片是患者的终身档案,一般要求病理科终身保存。如果患者借病理切片到外面去会诊,也无需特殊的条件保存它。
但是由于病理切片是玻璃做成的,玻璃容易碎,所以在切片的运行过程中要包装严实,最好是用一个专门的切片盒,将病理切片按序号码放在切片盒内,避免摔坏或者挤坏就可以了。
扫描电镜为什么要用液氮
冷冻电镜技术采用方法是使用保存在液氮或液氦温度下的冷冻标本进行成像。近40年来,对室温下衍射强度与低温下衍射强度衰减的测量表明,低温电子显微镜可以降低辐射损伤的影响。
酵母菌怎么制作
微生物的染色方法很多,各种方法应用的染料也不尽相同,但是一般染色都要通过制片及一套染色操作程序。
1、制片 在干净的载玻片上滴上一滴蒸馏水,用接种环进行无菌操作,挑取培养物少许,置载玻片的水滴中,与水混合做成悬液并涂成直径约1厘米的薄层,为避免因菌数过多聚成集团,不利观察个体形态,可在载玻片之一侧再加一滴水,从已涂布的菌液中再取一环于此水滴中进行稀释,涂布成薄层,若材料为液体培养物或固体培养物中洗下制备的菌液,则直接涂布于载玻片上即可。
2、自然干燥 涂片最好在室温下使其自然干燥,有时为了使之干得更快些,可将标本面向上,手持载玻片一端的两侧,小心地在酒精灯上高处微微加热,使水分蒸发,但切勿紧靠火焰或加热时间过长,以防标本烤枯而变形。
3、固定 标本干燥后即进行固定,固定的目的有三个: 1)杀死微生物,固定细胞结构。 2)保证菌体能更牢的粘附在载玻片上,防止标本被水冲洗掉。 3)改变染料对细胞的通透性,因为死的原生质比活的原生质易于染色。 固定常常利用高温,手执载玻片的一端(涂有标本的远端),标本向上,在酒精灯火焰外层尽快的来回通过3—4次,共约2—3秒钟,并不时以载玻片背面加热触及皮肤,不觉过烫为宜(不超过60℃),放置待冷后,进行染色。 以上这种固定法在微生物实验室中虽然应用较多普遍,但是应当指出,在研究微生物细胞结构时不适用,应采用化学固定法。化学固定法最常用的固定剂有:酒精(95%),酒精和醚各半的混合物,丙酮,1—2%的饿酸等。饿酸能很快固定细胞但不改变其结构,故较常用。应用饿酸固定细胞的技术如下:在培养皿中放一玻璃,在玻璃上放置玻璃毛细管,在毛细管中注入少量的1—2%饿酸溶液,同时在玻璃上再放置湿标本涂片的载玻片,然后把培养皿盖上,经过1—2分钟后把标本从培养皿中取出,并使之干燥。
4、染色 标本固定后,滴加染色液。染色的时间各不相同,视标本与染料的性质而定,有时染色时还要加热。染料作用标本的时间平均约1—3分钟,而所有的染色时间内,整个涂片(或有标本的部分)应该浸在染料之中。 若作复合染色,在媒染处理时,媒染剂与染料形成不溶性化合物,可增加染料和细菌的亲和力。一般固定后媒染,但也可以结合固定或染色同时进行。 5、脱色 用醇类或酸类处理染色的细胞,使之脱色。可检查染料与细胞结合的稳定程度,鉴别不同种类的细菌。常用的脱色剂是95%酒精和3%盐酸溶液。
6、复染 脱色后再用一种染色剂进行染色,与不被脱色部位形成鲜明的对照,便于观察。革氏染色在酒精脱色后用番红,石碳酸复红最后进行染色,就是复染。
7、水洗 染色到一定的时候,用细小的水流从标本的背面把多余的染料冲洗掉,被菌体吸附的染料则保留。
8、干燥 着色标本洗净后,将标本晾干,或用吸水纸把多余的水吸去,然后晾干或微热烘干,用吸水纸时,切勿使载玻片翻转,以免将菌体擦掉。
9、镜检 干燥后的标本可用显微镜观察。选取好的制片。
10、密封 盖上盖玻片在两侧加入密封胶,待胶凝固后,制作永久装片。
综上所述,装片制备的基本程序如下: 制片→固定→媒染→染色→脱色→复染→水洗→干燥→镜检→密封→贮存→OK
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